中国报告大厅网讯，随着全球对食品安全和公共卫生的关注度不断提升，2025年生化试剂行业呈现出快速增长的态势。这一增长主要得益于生化试剂在食品安全检测、微生物鉴定等领域的广泛应用。特别是在李斯特氏菌属的检测中，生化试剂盒的开发和应用成为行业研究的重点。本文将探讨基于数值鉴定法的李斯特氏菌属生化试剂盒的研制及效果评价，分析其在提高检测效率和准确性方面的优势。
《2025-2030年中国生化试剂行业竞争格局及投资规划深度研究分析报告》指出，李斯特氏菌属(Listeria)是一种重要的食源性致病菌，其中单核增生李斯特氏菌(L. monocytogenes)是全球公认的四大食源性致病菌之一。该菌能够引发严重的食源性疾病，对人类健康构成严重威胁。尽管只有单核增生李斯特氏菌能导致人类患病，但食品中非致病性李斯特菌的存在可作为潜在污染指标，提示存在致病性菌株交叉污染的风险。因此，开发高效、准确的李斯特氏菌属检测方法具有重要意义。
(一)数值鉴定法的理论基础
数值鉴定法是一种融合传统生化反应与现代计算机技术的快速检测技术。它通过条件概率最大近似值模型，整合数学、电子、信息及自动化等多学科技术，完成细菌鉴定。该方法能够快速准确地筛选样本并进行推理分析，具有操作简便、无需专业设备的特点，适合各类实验室使用。
(二)生化试剂盒的设计与优化
在前期建立的李斯特氏菌数值鉴定系统的基础上，设计并优化了微量化生化试剂配方，研制了半自动冻干数值鉴定生化试剂盒。该试剂盒包含12种微量化生化反应试剂，能够有效区分李斯特氏菌属内的17个种。通过优化生化反应组合与配方，确保了试剂盒的鉴定准确性和稳定性。
(三)生化试剂盒的使用方法
菌悬液的制备：将李斯特氏菌属细菌接种至培养基中，培养后挑取单菌落，稀释成0.5麦氏浊度的均匀悬浮液备用。
试剂盒的使用：将菌悬液注入试剂盒的分液槽中，平衡液面后使菌液均匀流入各反应孔，加入溶血试剂后置于36±1°C避光培养18-24小时。
结果分析：通过比色卡判读生化反应条各孔的阴阳性结果，并结合数值鉴定软件进行在线分析。
(一)标准菌株的鉴定结果
使用该生化试剂盒对11株李斯特氏菌标准菌株进行鉴定，结果均正确，鉴定准确率达到100%。鉴定百分数和T值均在99%以上，表明该试剂盒具有较高的鉴定准确性和可靠性。
(二)分离菌株的鉴定结果
对260株李斯特氏菌分离株进行鉴定，包括120株L. monocytogenes、130株L. innocua等，鉴定准确率达到99.23%。其中，2株菌株的鉴定结果与MALDI-TOF MS结果不一致，经API-Listeria和16S rRNA基因测序法验证后，确认为鉴定错误。这表明该生化试剂盒在实际应用中具有较高的准确性和稳定性。
(三)稳定性和保质期实验
批间稳定可重复性实验：三次实验结果一致，表明该试剂盒在不同批次间具有良好的稳定性。
保质期实验：经塑封处理的试剂盒在4°C环境中存放240天后，检测结果仍保持较高的准确性，证明其有效保存期为240天。
生化试剂行业现状分析指出，与主流商品化试剂盒相比，该数值鉴定生化试剂盒在多个关键性能参数上具有显著优势。例如，该试剂盒仅需12个反应即可有效区分李斯特氏菌属内的17个种，而商品化试剂盒通常需要更多的反应才能覆盖较少的菌种。此外，该试剂盒的检测成本仅为商品化产品的15.4%，显著降低了检测成本，提高了检测效率。
本研究成功研制出集数值鉴定、半自动化生化试剂及在线分析软件于一体的李斯特氏菌数值生化试剂盒。该试剂盒具有操作简便、鉴定范围广、成本低廉等显著优势，为李斯特氏菌属细菌的鉴定提供了一种高效、准确且经济的新方法。在食品安全领域，该试剂盒能够有效提高李斯特氏菌的检测效率和准确性，为保障公共卫生安全提供了强有力的技术支持。未来，将进一步扩大菌株数据库来源，优化鉴定方法，以提高试剂盒在复杂样本检测中的适用性，使其能够更好地服务于食品安全、公共卫生及微生物学研究等多个领域。
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